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使用CRISPR进行基因表达的剂量依赖性激活
2019-11-13 10:46:18
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导读 隶属于美国多个机构的一组研究人员开发了一种使用CRISPR基因编辑技术来剂量依赖性激活基因表达的方法。在发表于《自然生物技术》杂志上的论
隶属于美国多个机构的一组研究人员开发了一种使用CRISPR基因编辑技术来剂量依赖性激活基因表达的方法。在发表于《自然生物技术》杂志上的论文中，研究小组描述了他们以另一种方式改变基因表达的技术及其效果。
研究人员指出，先前的研究表明，使用CRISPR / Cas9基因编辑技术可以抑制或激活基因表达。但是直到现在，它还没有被用作实现基因表达剂量依赖性激活的方法。在这项新的工作中，研究人员找到了一种方法来利用化学表观遗传修饰剂(CEM)来做到这一点，该修饰剂专门设计用于通过使用内源性染色质激活机制的某些部分来激活所需的基因表达。他们指出，这样做消除了外源转录激活因子的必要性。
新方法涉及使用两个组件：第一个是Cas9，它与结合蛋白FKBP没有催化活性。第二个是用FK506制成的CEM，该CEM与将与所需细胞表观遗传机制相互作用的分子连接。更具体地说，他们创造了可以找到基因激活机制的CEM激活分子，包括CEM114，CEM87和CEM88。此类分子旨在与不同的所需酶结合。这两个部分一起以所需方式用于激活基因表达。
研究人员通过用荧光绿色蛋白感染HEK293T细胞，然后对表达指导RNA和非活性Cas9的细胞进行细胞计数来测试其系统。然后，他们使用质粒表达以及三种选择的CEM中的一种来测试基因的激活。然后，他们不得不等待两天，以确认与未处理的细胞相比，GFP表达增加了。他们还仔细研究了用CEM处理过的非活性Cas9，以确认正是CEM系统以所需的方式激活了GFP。通过这样做，他们发现用CEM87治疗是唯一导致GFP表达增加的测试案例。
研究人员建议，他们的技术可用于验证研究中要求剂量依赖性激活基因表达的情况。
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